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  甲基化修饰蛋白质组学

蛋白质的甲基化修饰大多发生在R、K上。在R上有单甲基化修饰以及不对称单甲基化修饰两种。K上有1、2、3甲基化修饰。精氨酸的甲基化修饰在RNA加工,基因转录,DNA的修复中大量表现。赖氨酸的甲基化修饰主要在组蛋白修饰中展现其功能。 人体甲基转移酶主要有两类:I型, PRMT1, PRMT3, PRMT4(CARM1), PRMT6, and PRMT8(ADMA); II型, PRMT5和 PRMT7(SDMA)。

技术原理

基于特异性的抗体能特异识别甲基化修饰的肽段,选用合适的甲基化修饰抗体将甲基化修饰肽段富集下来。对例如在R上的单甲基化修饰我们选用CST公司的特异性抗体kit(PTMScan® Mono-Methyl Arginine Motif [mme-RG] Kit #12235),对于K上的甲基化修饰目前CST公司并没有相应的抗体,一般情况下选择自己制备抗体,用于富集实验。

样品要求

  1. 动物组织的样品量湿重不少于200mg。
  2. 植物或真菌、细菌、噬菌体等微生物类样品量湿重不少于2g。
  3. 富含杂质或蛋白质含量低的样品量湿重不少于5g;如植物的根,木质部、韧皮部组织等。
  4. 体液类(唾液、羊水、脑脊液等)10mL以上,要保证不能溶血;血清要求500μl以上;尿液要求50mL以上。
  5. 如直接提供蛋白质提取物,浓度不少于2 mg/mL,总量不少于1 mg。为保证实验效果,请尽量告知缓冲液成分,如是否有硫脲、SDS、强离子盐等等。另样品中应不含核酸、脂类、多糖等影响分离效果的成分。
  6. 在细胞器蛋白质组学方面,提取细胞器或亚细胞器后,蛋白沉淀量在1 mg以上。
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