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  蛋白质胶点鉴定服务

采用MALDI-TOF/TOF-MS技术对考染、银染或DIGE胶点样本或者纯的蛋白样本进行蛋白鉴定。

技术方法

MALDI-TOF/TOF-MS(基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱, 英文名Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Tandem Time of Flight Mass Spectrometry)是一种新型的软电离生物质谱,其无论是在理论上还是在设计上都是十分简单和高效的。仪器主要由两部分组成:基质附助激光解吸电离离子源(MALDI)和飞行时间质量分析器(TOF)。MALDI的原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜,基质从激光中吸收能量传递给生物分子,而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子,而使生物分子电离的过程。因此它是一种软电离技术,适用于混合物及生物大分子的测定。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道,根据到达检测器的飞行时间不同而被检测即测定离子的质荷比(M/Z)与离子的飞行时间成正比 ,检测离子。MALDI-TOF/TOF-MS具有灵敏度高、准确度高及分辨率高等特点。

实验流程

Trypsin酶解→LC-ESI-MS/MS分析→数据库搜索→蛋白质鉴定结果

主要仪器

AB SCIEX TOF/TOF™ 5800 System

样本准备

样本类型 样本要求
双向凝胶电泳点 选取的电泳电需清析可见,将移液枪枪头剪去尖端一部分后,通过枪头抠出蛋白点后放入带盖小管加冰袋进行运输
SDS-PAGE条带 需单一蛋白质,纯度>90%, 条带清晰可见
蛋白质溶液 需单一蛋白质,纯度>90%, 蛋白质总量>5μg,浓度>0.1μg/μl
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